河南PCR實(shí)驗(yàn)室的防污染措施都有哪些？
發(fā)布時(shí)間：2021-07-28 16:00
PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。它能夠通過(guò)DNA基因追蹤系統(tǒng)來(lái)掌握患者體內(nèi)的病毒含量。它最大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問(wèn)題是容易污染，極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。那么河南PCR實(shí)驗(yàn)室的防污染措施都有哪些呢？
1、PCR實(shí)驗(yàn)室主要污染源
（1）臨床樣本中存在的大量待測(cè)微生物。
（2）科研中得到的質(zhì)粒克隆。
（3）以前分析研究的特定微生物。
（4）大量存在于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中的特定微生物。
（5）以前擴(kuò)增產(chǎn)物的殘留污染。
這也是PCR實(shí)驗(yàn)室最容易產(chǎn)生的將造成假陽(yáng)性的污染。PCR擴(kuò)增可以引起實(shí)驗(yàn)室中擴(kuò)增產(chǎn)物的積累，通常，一次典型的PCR擴(kuò)增可以產(chǎn)生10^9拷貝的靶序列，如果氣溶膠化，甚至最小的氣溶膠都會(huì)含有10^6拷貝的擴(kuò)增產(chǎn)物。如果不加以控制，在短期內(nèi)累積的氣溶膠化的擴(kuò)增產(chǎn)物即會(huì)污染實(shí)驗(yàn)室中的試劑、儀器設(shè)備和通風(fēng)系統(tǒng)，從而造成嚴(yán)重的實(shí)驗(yàn)室污染，出現(xiàn)大量的假陽(yáng)性結(jié)果。一些RNA擴(kuò)增技術(shù)如基于核酸序列的擴(kuò)增（NASBA）、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增 （TMA）和Qbeta復(fù)制酶等不易產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物的污染，這是由于它們的擴(kuò)增產(chǎn)物為RNA，可以被環(huán)境中的RNA酶迅速地降解。
2、防污染措施
（1）嚴(yán)格分區(qū)實(shí)驗(yàn)室及嚴(yán)格遵守工作程序
基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室分為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本準(zhǔn)備區(qū)、PCR擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)等，必需備有各自必需的儀器設(shè)備、工作服、手套、加樣器和通風(fēng)系統(tǒng)。在每個(gè)區(qū)使用的試劑和廢物，必需直接在其各自的區(qū)域內(nèi)分裝或包裝。操作人員必需注意防止通過(guò)他們的頭發(fā)、眼睛和衣服將擴(kuò)增產(chǎn)物從污染區(qū)攜帶至清潔區(qū)的可能性。
（2）化學(xué)清污
實(shí)驗(yàn)臺(tái)面可使用10%的次氯酸鈉（漂白劑）清洗，然后再用70%乙醇或清水洗去次氯酸鈉。次氯酸鈉具有氧化損傷核酸的作用，從而使可能留在實(shí)驗(yàn)臺(tái)面 的擴(kuò)增產(chǎn)物被破壞掉。要注意的是，次氯酸鈉不能區(qū)分提取的DNA和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，用次氯酸鈉處理的樣本不能用于核酸擴(kuò)增檢測(cè)。在實(shí)際工作中，有些物品比如放置擴(kuò)增反應(yīng)管的盤(pán)必需從污染區(qū)轉(zhuǎn)回清潔區(qū)時(shí)，在轉(zhuǎn)回之前，應(yīng)將其置于2-10%的次氯酸鈉溶液中過(guò)夜，并充分沖洗。
（3）擴(kuò)增產(chǎn)物的修飾
臨床PCR檢測(cè)通常由3或4個(gè)步驟組成：核酸提取和擴(kuò)增檢測(cè)試劑的配制。使用商品試劑盒時(shí)，試劑的配制量可大大減少；樣本的處理即靶核酸的提取；PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增產(chǎn)物的分析。使用實(shí)時(shí)熒光PCR方法，PCR擴(kuò)增和擴(kuò)增產(chǎn)物的分析同時(shí)完成。
如對(duì)以前擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行適當(dāng)修飾，應(yīng)可以消除其污染后面新的擴(kuò)增檢測(cè)，但為保證不影響靶核酸的擴(kuò)增檢測(cè)，擴(kuò)增產(chǎn)物修飾方法必需遵循兩個(gè)基本原則：一是擴(kuò)增產(chǎn)物修飾后，應(yīng)可以與隨后擴(kuò)增的靶序列區(qū)分，這就要求區(qū)別性修飾在打開(kāi)擴(kuò)增反應(yīng)管之前進(jìn)行；二是修飾不能干擾正常的擴(kuò)增檢測(cè)。
擴(kuò)增前修飾：UV照射、UNG酶處理。
擴(kuò)增后修飾：補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素、鹽酸羥胺、引物水解法。
以上就是河南PCR實(shí)驗(yàn)室的一些防污染措施。更多實(shí)驗(yàn)室相關(guān)產(chǎn)品信息，敬請(qǐng)關(guān)注河南中潤(rùn)實(shí)驗(yàn)工程公司官網(wǎng)，產(chǎn)品咨詢(xún)及實(shí)驗(yàn)室EPC設(shè)計(jì)建設(shè)請(qǐng)聯(lián)系網(wǎng)站客服。
